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| 它的复杂作用还不得知 | |||||||||
| 【2012-4-29】 | |||||||||
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酪氨酸激酶就是特异地将蛋白质底物上的某些酪氨酸残基磷酸化，从而调节其功能的酶。盘状结构域受体属于一种受体型蛋白酪氨酸激酶，可被天然纤维型胶原活化，从而介导基质金属蛋白酶的表达。DDR2在类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞中呈高表达状态，并具有较高的磷酸化水平，而其所活化的下游分子中，特别是MMP对关节软骨的主要成分II型胶原的降解能力高于其他胶原酶，因此认为“Ⅱ型胶原DDR2MMPs”通路中的关键分子可能成为减轻RA关节软骨破坏的药物作用靶位。然而目前有关此通路的研究报道甚少，我们构建C末端融合flag标签的人DDR2基因真核表达载体，旨在为进一步研究DDR2信号通路在RA中的影响奠定基础。 由于DDR2是RA病理进程中的关键分子，因此对其所进行的研究，无论是体内还是体外水平，都需要高表达且易于检测的工具载体。我们构建的DDR2flag/pShuttleCMV载体与以往工具载体的不同在于：一方面，它是腺病毒包装的穿梭载体，可用于DDR2相关腺病毒的包装，无论在RA滑膜细胞还是动物模型中都能达到一般真核表达载体所不具备的高转染/感染效率；同时其所携带的flag标签也大大提高了目的基因的检测灵敏性和特异性。我们以含有人DDR2全长cDNA的质粒为模板，通过PCR法获得了C末端融合有flag标签的人DDR2基因，并构建了DDR2flag基因的真核表达载体，该表达载体在真核细胞HERK293中能够正确表达定位，这为进一步研究DDR2功能奠定了基础。 那么关于这项研究发现了什么？有研究发现，DDR1在胶原刺激下与Src结合后发生自身磷酸化，继而被基质金属蛋白酶水解为氨基端外功能区及酪氨酸磷酸化的胞内羧基残段（CTF），目前推测被剪切掉的胞外功能区可能有着竞争结合并中止胶原配体持续发挥作用的负反馈功能，但同属盘状结构域受体家族的DDR2存在此现象的文献报道尚少。有趣的是，我们在观察DDR2亚细胞定位时发现其存在少量胞核分布，这提示，DDR2很可能与DDR1一样有着类似的限制性蛋白水解现象，这也预示着DDR2除具有膜受体功能外，在信号转导过程中可能还具有更为复杂的作用。这些具体作用目前还不得知。 （6）（32） |
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