在做基因实验的时候要制定相关的实验方法，目的基因的获得我们是通过的方法。在实验的最初我们只是基于的蛋白质编码区设计了一对引物，根据多克隆位点在上下游设计了三个酶切位点，使其能通过克隆扩增后反向连接到真核表达载体中，应用此对引物进行扩增时，电泳结果在处有微弱亮带(目的基因），且周围有很多杂带存在，将泳带切胶回收后，经测序证明不是我们想要的目的基因，分析可能是引物的特异性不高，在基因的其他的位置亦有此引物的结合位点所造成的，故此又以模板设计了一对外引物，先用外引物扩增后，再用带有内切酶的内引物进行扩增，结果得到了的单一片段，保证了反应的特异性。在制定这方法的时候要保证反应在预料之中。

　　要对身体有很大的了解才能使研究进行下去，肾上腺素受体分为几种亚型。目前对于肾上腺素能受体的研究，大多是应用亚型选择性的受体激动剂来研究其在膀胱松弛过程中的作用，但其选择性依赖于受体激动剂的特异性，而我们构建亚型的反义真核表达载体，转录出反义的，从基因水平封闭其亚型的表达，然后用非选择性激动剂处理细胞以消除激动剂亲和性和效能差异造成的影响，则更加确切。只有十分了解才能十分肯定实验的进行。

　　在做实验定的时候也要准备相对应的素材，我们选用的真核表达载体是一种逆转录病*表达载体，相对于脂质体而言，逆转录病*载体所介导的基因转移效率极高， 时可达预料的结果，并且可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体中长期表达，可以使我们能有足够的时间来观察在其他两种亚型被抑制之后的膀胱平滑肌的各种生物学特性的改变。而后者往往由于细胞摄入率较低或进入细胞后即被降解而影响其反义抑制效果。经酶切鉴定和序列分析，本实验所克隆的全长序列与报道的完全一致且插入载体的方向也完全正确，重组病*载体经双酶切鉴定，释放出的片段，说明逆转录病*反义真核表达载体已构建成功，这就为下一步亚型功能的研究奠定了基础。为以后的研究方向制定了前进的动力和前进的方向。

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