现今克隆技术不断更近，SSH方法是近年发展起来的一项新的基因克隆技术，与传统的方法比较，具有实验周期短、易操作、可靠性高、假阳性率低等特点，能有效地分离扩增低丰度特异表达的基因，可以在较短的时间内获得较理想的实验结果。我们构建真核表达载体pcDNA3。C1并转染肝母细胞瘤细胞系HepG2，以转染空白载体的相同细胞系作为对照，以几种转染的细胞系中提取的mRNA为起始材料，应用SSH方法成功地构建了C1反式激活相关基因差异表达的cDNA消减文库，随机挑选文库中几十个克隆送测序进行鉴定，结果发现C1可上调一些与细胞周期及代谢、肿瘤发生发展、脂肪代谢有关的基因，来进行基因的测序鉴定。

　　蛋白合成在人体内的作用很大，细胞周期及代谢相关蛋白，如人类假定的翻译起始因子，核糖体蛋白，均与蛋白合成有关，泛酰酸激酶（Pank）是CoA生物合成途径中的必需的酶。肿瘤发生发展及抗肿瘤治疗相关的蛋白，如人类B细胞vrel网状内皮组织增殖病*癌基因与多种肿瘤的发生有关，可在多种组织激活多种基因转录，如浆液性乳头状瘤、神经母细胞瘤、淋巴瘤，该基因的激活及过量表达则可能导致细胞癌变。甲胎蛋白（AFP）参与细胞的增殖、代谢的调控以及巨噬细胞和Ｔ淋巴细胞之间的相互作用。在免疫应答中，认为AFP的作用是免疫抑制，主要表现为抑制母体对胚胎发育的免疫应答以及肿瘤患者对肿瘤的免疫应答，因此AFP的过量表达可能抑制机体的抗肿瘤免疫，与肿瘤发生及发展密切相关，故在医学需对AFP加进研究。

　　枯草菌素酶有一定的利用价值，枯草菌素酶在肝脏是高表达并有助于高胆固醇血症发生。AFP不仅具有免疫抑制作用，运输功能也是其最基本的功能，并且与脂肪代谢有关。已经证明其最主要的功能之一就是运输脂肪酸，大部分是不饱和脂肪酸。资料表明，游离脂肪酸，特别是不饱和脂肪酸与酒精性和非酒精性脂肪性肝炎的发生和发展密切相关。肝组织内不饱和脂肪酸增多可通过促进产基质细胞（主要是肝细胞）增殖和（或）合成ECM，参与脂肪肝肝纤维化的形成，促进肝纤维化的发生和发展。本研究结果显示，C1可反式激活AFP及PCSK9基因，使其蛋白表达增加，提示可能与肝脂肪变及肝纤维化发生发展有关，是蛋白表达增加的因素之一。

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