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    为研究奠定基础的元素
    【2012/5/4】

        

      

      调节 是调节酶中没有催化活性的 ,但其通过与效应物结合、改变构象,进而影响催化 的活性。β 是BKCa通道的调节 ,通过感受[Ca2+]i及电压的变化调控BKCa的动力学特性,在调控细胞膜电位及肌张力过程中对细胞膜的极化状态起负反馈调节作用。我们前期的研究发现高胆固醇条件下,兔SO细胞[Ca2+]i呈过载状态,进一步研究发现高胆固醇血症兔的BKCa通道活性降低。由于β 是BKCa通道的调节 ,对调节[Ca2+]i起重要作用。我们采用快速、灵敏的RACE技术扩增兔SO组织BKCa通道β 序列,该技术从操作及引物设计上都有一定难度,在实验中我们先是根据其同源序列设计简并引物,反复进行RTPCR预实验以提高PCR扩增的特异性,然后在PCR条件优化的基础上进行RACE实验,最终经RTPCR扩增得到这段基因序列。

      生物信息学分析表明兔SO组织BKCa通道β 基因cDNA全长为一千多bp,开放读框位于核苷酸序列,编码 酸,同兔其他组织该基因的cDNA相比较组织造成的特异性几乎不存在,他们编码的 酸序列完全一致。测序结果显示,该基因端的核苷酸数目和GenBank中已有的兔其他组织该基因β cDNA相比分别长了碱基。而在终止密码子后有加尾信号和长的polyA尾。非编码区仅有少数碱基的突变。这些特点符合基因全长cDNA序列结构的特点。同源性分析显示该基因与人类、猕猴、黑猩猩、大鼠、小鼠、家犬和牛等哺乳动物的核苷酸序列及 酸序列都具有很高的同源性,说明该基因序列十分保守。

      进一步分析显示该 属于膜蛋白,具有两个跨膜螺旋区,N端没有信号肽存在,由位于胞内的C末端和N末端以及一个长的胞外段组成。该 存在有四个结构功能域,并且有一个蛋白激酶A(PKA) 化位点及两个可能的N糖基化位点。这些性质和GenBank中兔的其他组织的β 的分析结果完全相似。总之,我们采用cDNA末端快速扩增及RTPCR技术首次从兔SO细胞扩增出BKCa通道β 全长cDNA序列,并采用生物信息学的方法分析了其种属间的同源性,预测了该基因的各种功能结构域,为进一步研究该基因的功能和调控奠定了基础。有了这个基础,我们可以更好的研究它。

      (6)(32)


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